1 范圍

      本文件確立了畜禽飼料安全性評價中的蛋雞飼養(yǎng)試驗程序，規(guī)定了試驗方案設(shè)計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析、試驗報告和資料存檔等階段的操作指引。

      本文件適用于飼料原料、飼料添加劑安全性評價的蛋雞飼養(yǎng)試驗。

2 規(guī)范性引用文件

      下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

      GB 5749 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

      GB 13078 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

      GB/T 14699.1 飼料 采樣

      NY/T 33 雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)

      NY/T 388 畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

      NY/T 823 家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量計算方法

3 術(shù)語和定義

      本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4 飼養(yǎng)試驗程序

4.1 飼養(yǎng)試驗程序的構(gòu)成

      蛋雞飼養(yǎng)試驗程序包括6個階段，分別為試驗方案設(shè)計、飼糧配制、試驗實施、數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計分析和試驗報告。

4.2 試驗方案設(shè)計

4.2.1 試驗方案構(gòu)成

      飼養(yǎng)試驗開始前，根據(jù)受試物特性及有效劑量進(jìn)行試驗方案設(shè)計。試驗方案包括試驗動物及免疫程序、試驗分組及重復(fù)數(shù)、處理設(shè)置、飼糧配方、試驗期、觀察與檢測和方案確認(rèn)。

4.2.2 試驗動物及免疫程序

4.2.2.1 確定試驗動物的信息，包括品種、日齡、生產(chǎn)階段和健康狀況、動物來源和種群規(guī)模；試驗蛋雞應(yīng)來自于同品種（系）、同日齡、同批次和生產(chǎn)性能相近的健康蛋雞。

4.2.2.2 根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵?，制定試驗動物免疫程序?/p>

4.2.3 試驗分組及重復(fù)數(shù)

      遵循隨機(jī)、重復(fù)和局部控制的原則進(jìn)行試驗動物分組。各試驗組和對照組的試驗重復(fù)數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析的要求。每個處理組包括不少于6個重復(fù)，每個重復(fù)不少于10只。試驗開始時，處理組間、處理內(nèi)重復(fù)組間蛋雞的初始體重、生產(chǎn)性能差異均不顯著。

4.2.4 處理設(shè)置

4.2.4.1 試驗分組

      試驗至少應(yīng)包括三個組，即對照組、有效劑量組和多倍劑量組。

4.2.4.2 試驗劑量

      試驗劑量按以下原則確定：

      a）一般情況下，有效劑量組應(yīng)選用最高限量。如果沒有最高限量，應(yīng)選用最高推薦劑量。如果沒有最高推薦量，應(yīng)根據(jù)受試物的自身特性，選擇最低推薦劑量的2倍～5倍作為有效劑量。

      b）多倍劑量組一般選用上述有效劑量的10倍。

      c) 如果受試物的耐受劑量低于有效劑量的10倍，安全性評價試驗應(yīng)能通過尸檢、組織病理學(xué)以及其他適宜的試驗方法提出反映受試物毒性的特異性指標(biāo)，并計算出受試物的安全系數(shù)。

4.2.5 飼糧配方

      根據(jù)受試物特點(diǎn)、使用方法，按照NY/T 33或相應(yīng)蛋雞品種（系）飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)確定飼糧配方，對照組飼糧中通常不宜含有受試物；但對于某些動物機(jī)體的必需營養(yǎng)素（如氨基酸、維生素、微量元素等），對照飼糧中該營養(yǎng)素水平應(yīng)低于動物需要量、但又不至于因為該營養(yǎng)素嚴(yán)重缺乏引起死淘率增加。

4.2.6 試驗期

      試驗期依據(jù)試驗?zāi)康暮鸵蟠_定。育雛育成期飼養(yǎng)試驗應(yīng)從1日齡開始，試驗期不低于35d；產(chǎn)蛋期飼養(yǎng)試驗從16周齡～21周齡開始，試驗期不低于56d。如果受試物僅適用于蛋雞特定生產(chǎn)階段，試驗期應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整并說明調(diào)整的理由，但不得少于28d，而且應(yīng)考察對該營養(yǎng)素敏感的特異性指標(biāo)。

4.2.7 觀察與檢測

4.2.7.1 臨床觀察

      試驗期內(nèi)應(yīng)每天觀察試驗蛋雞臨床表現(xiàn)、采食情況、飲水情況、糞便情況、生長情況、產(chǎn)蛋情況和蛋品質(zhì)情況，詳細(xì)記錄不良反應(yīng)。對試驗中出現(xiàn)的不明原因的死亡應(yīng)及時進(jìn)行尸檢，如有條件，宜進(jìn)行組織學(xué)分析。

4.2.7.2 生產(chǎn)性能測定

      按照NY/T 823相關(guān)規(guī)定，測定和計算蛋雞生產(chǎn)性能相關(guān)指標(biāo)。育雛期、育成期、預(yù)產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應(yīng)測定采食量、始末體重、體重均勻度、脛骨長度、脛長整齊度、日增重、飼料轉(zhuǎn)化率、死亡率和淘汰率等指標(biāo)。產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應(yīng)測定采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、產(chǎn)蛋量、飼料轉(zhuǎn)化率、破蛋率、軟蛋率、商品蛋合格率、死亡率和淘汰率等指標(biāo)。

4.2.7.3 蛋品質(zhì)檢測

      試驗開始和試驗結(jié)束時（必要時增加試驗中期），產(chǎn)蛋期蛋雞飼養(yǎng)試驗應(yīng)根據(jù)試驗?zāi)康臏y定雞蛋品

質(zhì)相關(guān)的全部或部分指標(biāo)，如蛋黃顏色、蛋殼顏色、蛋白高度、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、哈氏單位、蛋黃比例、蛋清比例、蛋殼比例、蛋形指數(shù)等。

4.2.7.4 血液學(xué)和臨床生理生化指標(biāo)檢測

      試驗開始和試驗結(jié)束（必要時增加試驗中期）時每重復(fù)組隨機(jī)抽檢至少2只代表性蛋雞，分別采集血樣進(jìn)行血常規(guī)（指標(biāo)）、血液生化指標(biāo)及其他與受試物相關(guān)的各種血液生化參數(shù)的檢測。血常規(guī)指標(biāo)主要包括白細(xì)胞計數(shù)（WBC）及分型、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計數(shù)（PLT）等指標(biāo)；血液生化指標(biāo)主要包括谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、尿酸（UA）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標(biāo)。

4.2.7.5 組織病理學(xué)檢查

4.2.7.5.1 尸體解剖學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，每重復(fù)組隨機(jī)抽檢至少2只代表性蛋雞，進(jìn)行系統(tǒng)屠宰解剖學(xué)檢查，為進(jìn)一步的組織學(xué)檢查提供依據(jù)。

4.2.7.5.2 臟器系數(shù)（指數(shù)）測定：試驗結(jié)束時，每重復(fù)組隨機(jī)抽檢至少2只代表性蛋雞，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，并計算臟器系數(shù)。

4.2.7.5.3 組織病理學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，對多倍劑量組及尸檢異常動物的主要器官進(jìn)行系統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查，詳細(xì)檢查的器官和組織包括：心、肝、脾、肺、腎、胸腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、直腸、骨髓等組織。

4.2.7.6 其他特異性觀測指標(biāo)

      如有必要，根據(jù)受試物的作用特點(diǎn)和用途，增加相應(yīng)的特異性觀測指標(biāo)和敏感性指標(biāo)。

4.2.8 方案確認(rèn)

      試驗設(shè)計完成后，形成書面試驗方案，且應(yīng)經(jīng)試驗負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。

4.3 飼糧配制

4.3.1 根據(jù)飼料原料和飼料添加劑的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選擇符合質(zhì)量要求的飼料原料和飼料添加劑，衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB13078規(guī)定。按照試驗方案確定的配方和工藝，進(jìn)行飼糧配制。飼糧在配制、貯運(yùn)過程中避免受到污染。

4.3.2 根據(jù)受試物特性及使用方法確定飼糧加工方法、飼糧類型、粒度等。各處理間試驗因子以外的其他因素，如粒型、粒度、加工方法等，應(yīng)保持一致。

4.3.3 按照GB/T 14699.1采集試驗所用飼料（包括飼料原料和飼糧）樣品，根據(jù)國家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的方法測定常規(guī)營養(yǎng)成分含量和受試物有效成分含量，證實所配制的飼糧滿足配方設(shè)計的要求后進(jìn)入試驗實施階段。

4.4 試驗實施

4.4.1 飼養(yǎng)管理

4.4.1.1 飼養(yǎng)開始前，檢查、安裝和調(diào)試飼養(yǎng)設(shè)施及設(shè)備，確保設(shè)施及設(shè)備性能完好。使用前1周對飼養(yǎng)設(shè)施設(shè)備及圈舍進(jìn)行清理、消毒。

4.4.1.2 試驗雞舍內(nèi)溫度、濕度、風(fēng)速、照度等環(huán)境參數(shù)應(yīng)符合NY/T 388的要求并參照相應(yīng)品種飼養(yǎng)管理手冊執(zhí)行。當(dāng)環(huán)境參數(shù)的空間分布均勻一致時，處理和重復(fù)組的空間位置應(yīng)隨機(jī)安排；當(dāng)環(huán)境參數(shù)

出現(xiàn)空間分布不均勻時，根據(jù)差異進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組安排。如試驗?zāi)康挠刑厥庖螅瑧?yīng)按需求重新設(shè)定環(huán)境參數(shù)。

4.4.1.3 試驗雞的飼養(yǎng)方式、飼養(yǎng)管理、免疫程序應(yīng)保持完全相同。免疫措施不應(yīng)干擾受試物的作用模式。

4.4.1.4 根據(jù)試驗雞品種、氣候溫濕度、試驗舍通風(fēng)降溫條件等確定適宜的飼養(yǎng)密度。

4.4.1.5 試驗雞飲水供應(yīng)充足，水質(zhì)應(yīng)符合GB5749規(guī)定，自由飲水。

4.4.2 臨床觀察

      試驗期內(nèi)每天觀察試驗動物臨床表現(xiàn)、采食、飲水、排泄、產(chǎn)蛋情況，觀察并記錄死淘情況。

4.4.3 指標(biāo)檢測

4.4.3.1 生產(chǎn)性能測定按照4.2.6.2進(jìn)行。

4.4.3.2 蛋品質(zhì)檢測按照4.2.6.3進(jìn)行。

4.4.3.3 血液生化指標(biāo)檢測按照4.2.6.4進(jìn)行。

4.4.3.4 組織病理學(xué)檢查按照4.2.6.5進(jìn)行。

4.4.3.5 檢測方法應(yīng)采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或國際公認(rèn)方法。如果采用文獻(xiàn)報道方法或新建方法，應(yīng)提供方法確證的數(shù)據(jù)資料，說明其合理性。

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